細(xì)胞凍存流程如下：

一、貼壁細(xì)胞凍存流程：

1、將胰酶、培養(yǎng)基提前37度預(yù)熱；凍存液提前配好放到4度冰箱預(yù)冷；
2、先將裝有細(xì)胞的方瓶從培養(yǎng)箱拿出，用酒精噴灑瓶身后將搖瓶拿進(jìn)凈臺(tái)；
3 、打開(kāi)方瓶瓶蓋，將方瓶中的培養(yǎng)基倒干凈；
4、根據(jù)細(xì)胞消化難易程度添加適量的胰酶；T25方瓶加1 ml胰酶,T75方瓶加2ml胰酶；
5、 根據(jù)細(xì)胞消化難易程度放入37度培養(yǎng)箱消化1-5 min，知道看見(jiàn)大片的細(xì)胞開(kāi)始脫落，要及時(shí)終止消化；
6、 終止培養(yǎng)基需要含有至少10%血清，通常終止比例為1:10（1ml胰酶需要加入10 ml終止培養(yǎng)基），對(duì)胰酶比較敏感的細(xì)胞需要終止后離心后換新鮮的培養(yǎng)基；
7、 終止后將細(xì)胞輕輕吹打混勻，避免結(jié)團(tuán)，細(xì)胞收集到15 ml或者50 ml離心管中，將離心管配平，放入離心機(jī)中1000 rmp5分鐘；
8、 將離心管從離心機(jī)中取出，用酒精噴灑后拿進(jìn)凈臺(tái)；
9、棄掉離心管中上清，加入預(yù)冷的凍存液，吹打混勻；

10、 將混勻的細(xì)胞加入凍存管中；
11、將凍存管放入凍存盒中，蕞后放入-80°冰箱；
12、 第二天把細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮；

二、懸浮細(xì)胞凍存流程：
1） 先將裝有細(xì)胞的搖瓶從培養(yǎng)箱拿出，用酒精噴灑瓶身后將搖瓶拿進(jìn)凈臺(tái)；
2） 打開(kāi)搖瓶瓶蓋，取適量細(xì)胞放入50 ml離心管或15 ml離心管中；
3） 將離心管配平，放入離心機(jī)中1000 rmp5分鐘；
4） 將離心管從離心機(jī)中取出，用酒精噴灑后拿進(jìn)凈臺(tái)；
5） 棄掉離心管中上清，加入提前預(yù)冷的凍存液，吹打混勻；
6） 將混勻的細(xì)胞加入凍存管中；
7） 將凍存管放入凍存盒中，蕞后放入-80°冰箱；
8） 第二天把細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮；